什么是内参,内参的作用是什么?如果pcr检测中内参曲线未起该如何处理实验结果?

1. 什么是内参,内参的作用是什么?如果pcr检测中内参曲线未起该如何处理实验结果?

内参的最主要作用是对每孔的加样进行监控，一个合格稳定的内参在每次加样后的应该有正常曲线，没有曲线说明这个孔里的样品没有加

2. 做RT-PCR内参的作用是什么？应该如何选择管家基因

你说的应该是real time PCR吧，注意RT其实是逆转录reverse transcription的缩写，和real time一定要分开来。
常说的qPCR，qRT-PCR，都是通过实时（real time）的方法，测定样品中某个模版的起始量ct值
但是呢，由于之前RNA提取、反转等步骤，各个步骤存在不同的效率，ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量，因此，需要一个内参来做为参考。
比方说，A基因的ct值，在a样品中是18，在b样品中是20，由于a b样品存在RNA质量等等一系列不同，你无法直接就判断这个基因在a样品中的表达量是b样品的4倍。
这时候，我们需要一个内参，假如内参ct值在a样品中是14，而在b样品中是15。由于内参的稳定性，在不同样品中被认为是表达量一致的，因此，A基因的在ab样品之间的-ΔΔct值是1，也就是表达量为2倍的关系。
这里，我们可以知道内参的作用，即通过测量内参，可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化。内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因，这就是为什么内参经常选择看家基因的原因。以小鼠为例，常用的内参有actin gapdh hprt等等。
当然，现在的很多观点认为这些基因在不同组织中丰度也不同，例如gapdh，在线粒体含量高的组织中丰度高，很多人认为用基因组DNA做内参会更加靠谱，当然这是后话了，选择gapdh无碍于现阶段的实验，如果觉得不靠谱，可以选择两个内参。
你所研究的物种，应该有人已经发表过相应的内参，直接上数据库搜就可以了。
原创内容，码字不易，万望采纳。

3. RT-PCR是，内参是什么时候加入，作用是什么？谢谢

你说的应该是real
time
pcr吧，注意rt其实是逆转录reverse
transcription的缩写，和real
time一定要分开来。
常说的qpcr，qrt-pcr，都是通过实时（real
time）的方法，测定样品中某个模版的起始量ct值
但是呢，由于之前rna提取、反转等步骤，各个步骤存在不同的效率，ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量，因此，需要一个内参来做为参考。
比方说，a基因的ct值，在a样品中是18，在b样品中是20，由于a
b样品存在rna质量等等一系列不同，你无法直接就判断这个基因在a样品中的表达量是b样品的4倍。
这时候，我们需要一个内参，假如内参ct值在a样品中是14，而在b样品中是15。由于内参的稳定性，在不同样品中被认为是表达量一致的，因此，a基因的在ab样品之间的-δδct值是1，也就是表达量为2倍的关系。
这里，我们可以知道内参的作用，即通过测量内参，可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化。内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因，这就是为什么内参经常选择看家基因的原因。以小鼠为例，常用的内参有actin
gapdh
hprt等等。
当然，现在的很多观点认为这些基因在不同组织中丰度也不同，例如gapdh，在线粒体含量高的组织中丰度高，很多人认为用基因组dna做内参会更加靠谱，当然这是后话了，选择gapdh无碍于现阶段的实验，如果觉得不靠谱，可以选择两个内参。
你所研究的物种，应该有人已经发表过相应的内参，直接上数据库搜就可以了。
原创内容，码字不易，万望采纳。

4. 实时荧光定量pcr内参是什么东西

实时荧光定量pcr内参是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。

扩展资料：

PCR原理：
1、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
2、PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
参考资料来源：百度百科—实时荧光定量PCR

5. qRT-PCR中内参是什么?一个内参够不够

内参基因也称为管家基因。理论上，其表达一直都很恒定，很少受外界影响。这种基因的表达也称之为组成性表达。

6. western及pcr中关于内参和marker的问题，期待您的解答

首先要明白，marker和内参不是一种东西。Marker是用来标定蛋白或者DNA大小的。内参对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。其作用是校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。

pcr产物检测一般marker就可以了。不用内参。
western一般全都要用。

免疫组化检测蛋白偏重于蛋白在细胞及组织中的表达分布，定量较为不精确。所以要根据你实验的目的选择实验方法。

7. 做RT-PCR内参的作用是什么？应该如何选择管家基因啊?

内参的选择：普通PCR内参的大小没有多大要求，但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时，加入的浓度可能会不一致，即使用分光广度计测其浓度，也会有仪器误差.PCR时，每个标本都要做对应的内参，而且每次都要做，跑出的条带进行灰度分析，用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量. 你可以去生物帮那里了解。那里面向生物研究者、企业和研究机构，提供最新、领先、精准、高效、全面的生物产品和技术信息。      1. 物种：拟南芥(arabidopsis)或maize 2. 基因名称：18S rRNA 3. 模板：cDNA 4. PCR类型及目的：RT-PCR 5. Forward primer (5’-3’): CCATAAACGATGCCGGA Reverse primer (5’-3’): CACCACCCATAGAATCAAGA Probe: 无 6. 产物长度(bp)：350 7. 引物浓度：50 pmol/ul 8. 退火温度：54.1 9. 所用仪器：PE-9600 10. 提交者ID：yuxing955 11. 参考文献原文：本人亲自验证，还有本实验室其他人亲自验证。 可以参考： please click to connect  www.bio1000.com/zt/dna/225764.html .hope that i can help you 1. 物种： maize 2. 基因名称：actin 3. 模板：cDNA 4. PCR类型及目的：RT-PCR 5. Forward primer (5’-3’): AAATGACGCAGATTATGTTTGA Reverse primer (5’-3’): GCTCGTAGTGAGGGAGTACC Probe: 无 6. 产物长度(bp)： 7. 引物浓度：50 pmol/ul 8. 退火温度：54.1 9. 所用仪器：PE-9600 10. 提交者ID：yuxing955 11. 参考文献原文：本人亲自验证，还有本实验室其他人亲自验证         你可以去生物帮自己查找一下啊，应该有帮助。

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8. 实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题

做定量PCR的话，一般不会在一个样品中加入两对引物，内参和你的目的基因都是分别进行反应的。比如说你有3个样品，每个样品需要测定目的基因A，B和内参，那就做3*3*3=27个孔就好了，3个样品，每个样品测三个基因，每一个基因做3个重复取平均。
标准曲线的话，既然你已经做内参了，标准曲线就不用做了。把你的目的基因测得的量除以内参，做一个标准化就可以比较不同样品中目的基因的差异了。